Бумажная хроматография и блоттинг
Принцип распределительной хроматографии (distribution chromatography) является основой разделения веществ с использованием хроматографической бумаги. Распределение разделяемых веществ между стационарной фазой (бумага в качестве носителя) и подвижной фазой (элюент) достигается благодаря различной скорости движения.
Это их свойство определяется различной природой веществ (различными коэффициентами распределения, молекулярной массой и зарядом).
Однако, могут иметь место абсорбция и ионообменные процессы.
Правильный выбор подвижной фазы очень важен для того, чтобы избежать абсорбции, в то время как качество бумаги позволяет минимизировать обменные процессы. Благодаря тщательному подбору сырья (содержание целлюлозы свыше 97%) и строгому контролю за процессом производства практически удается избежать мешающего влияния материала бумаги на процесс разделения.
Бумага сортов «FN» обычно используется для хроматографической идентификации веществ, полупрепаративных и препаративных целей. Сорта FN11 – FN18 характеризуются низким содержанием примесей (зольность 0,02% в соответствии с DIN 54370) и, следовательно, обеспечивают возможность количественного анализа компонентов образца после хроматографического разделения.
Гладкая поверхность и пропорциональная толщина сортов «BF» обеспечивают постоянство транспортных характеристик на всей площади контакта. Что позволяет использовать их в различных техниках блоттинга: полусухой блоттинг, электро-блоттинг, вакуумный, dot/slot – блоттинг.
| Сорт | Серия | Удельный вес, г/м 2 | Толщина, мм | Высота абсорбции, мм/30 мин | Свойства / Основное применение |
| FN 1 | 501 | 90 | 0,20 | 145 |
Самая высокая скорость миграции элюента для тонких сортов аналитической бумаги; используется для серийных и повторных разделений небольших количеств веществ, когда отсутствуют повышенные требования к точности разделения |
| FN 2 | 502 | 120 | 0,25 | 145 |
Такая же высокая скорость миграции элюента, как и для сорта FN1, но поскольку бумага толще, то и емкость – больше; поверхность гладкая |
| FN 3 | 503 | 90 | 0,19 | 93 |
Мягкая поверхность; средняя скорость миграции элюента; рекомендована для анализа белка сыворотки (например, человеческий альбумин) |
| FN 4 | 504 | 120 | 0,24 | 93 |
По характеру абсорбции идентичен сорту FN3 (такая же высота абсорбции), но поверхность более гладкая; предназначена для разделения значительных количеств вещества поскольку бумага более толстая |
| FN 5 | 505 | 90 | 0,17 | 60 |
Хроматографическая бумага для аналитических целей; самая высокая точность при разделении, самая низкая скорость миграции элюента; поверхность мягкая. Используется для циркулярной и горизонтальной техники проведения анализа |
| FN 6 | 506 | 120 | 0,22 | 60 |
Скорость миграции элюента такая же как и для сорта FN5 при максимальной точности, но бумага более толстая и, следовательно, более предпочтительна для разделения значительных количеств вещества; поверхность гладкая |
| FN 7 | 507 | 150 | 0,32 | 145 |
Самая высокая скорость миграции элюента; поверхность мягкая; используется для аналитических целей, когда отсутствуют повышенные требования к точности разделения; достаточно толстая бумага для разделения больших количеств веществ или для полупрепаративных целей |
| FN 7а | 508 | 200 | 0,32 | 145 |
Такая же высокая скорость миграции элюента и толщина как и для FN 7, но большая плотность; предпочтительна для разделения больших количеств веществ или для полупрепаративных целей |
| FN 8 | 509 | 280 | 0,55 | 190 |
Очень высокая скорость миграции элюента; поверхность мягкая; предназначена для разделения высокомолекулярных соединений в режиме электрофореза а также для препаративных целей |
| FN 30 | 526 | 390 | 0,90 | 235 |
Наиболее толстая хроматографическая бумага с самой высокой скоростью миграции элюента; используется для препаративных целей при разделении больших количеств вещества |
| FN 100 | 527 | 195 | 0,35 | 130 |
Средняя толщина; высокая скорость миграции элюента; идеальная комбинация как для хроматографии, так и для гель-блоттинга. Идеально подходит для основных целей использования блоттинговой бумаги для Южного, Северного, Западного блоттинга, также используется в технике полусухого блоттинга |
| BF 1 | 518 | 90 | 0,16 | 80 /10 мин |
Наиболее тонкая бумага из сортов BF, средне-быстрая скорость абсорбции; используется в качестве покрытия гель-мембранного сэндвича в буферном танке при электроблоттинге |
| BF 2 | 519 | 190 | 0,36 | 70 /10 мин |
Так как этот сорт толще и имеет немного более низкую скорость абсорбции, чем BF1, то он может быть использован и в качестве покрытия гель-мембранного сэндвича как BF1, и как защитный слой при размещении мембраны на пористой подложке в соответствии с методами вакуумного или dot/slot блоттинга |
| BF 3 | 520 | 330 | 0,76 | 130 /10 мин |
Толщина вдвое больше, чем у BF2, высокая скорость абсорбции и емкость, хорошо подходит для транспорта буферной жидкости и как накопитель буфера согласно капиллярному и полусухому методу |
| BF 4 | 521 | 550 | 1,3 | 160 /10 мин |
Наиболее толстая бумага для блоттинга с самой высокой скоростью абсорбции и наиболее высокой абсорбционной способностью. Предпочтительны для использования, когда небольшое количество слоев бумаги должны обеспечить высокую буферную способность. Сокращение числа слоев минимизирует риск присутствия пузырьков воздуха в упаковке блоттингового сендвича. Обычно используется для транспорта ДНК и РНК согласно технике Южного и полусухого блоттинга |